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伯樂t100pcr儀 擴增反應的步驟
更新時間:2023-05-11   點擊次數:450次
PCR(Polymerase Chain Reaction),是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點。通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。
 
經典的PCR擴增反應分為三步:

1、高溫變性:模板DNA經加熱至95℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;

2、低溫退火:模板DNA與引物的復性,模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;

3、適溫延伸:DNA模板--引物結合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以核苷酸為反應原料,靶序列為模板,按堿基互補配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。
 

影響擴增的因素:

1、由于各種原因,造成的PCR擴增體系中出現了非目的檢測樣本本身的模板,使得PCR結果出現假陽性

2、操作錯誤或者誤差造成的模板間交叉污染

3、PCR試劑的污染

4、PCR實驗器材的污染

5、PCR擴增產物的氣溶膠污染

1 (7).jpg

防止污染的首要原則是要設置NTC(No Template Contro|)對照,一個不含有模板DNA但含有PCR體系中所有其他成分的對照。如果不能在污染的第一時間發現,會導致后續一系列的數據無法使用。準備PCR體系的移液器要,千萬不能用吸取過PCR產物的移液器去準備PCR體系。

技術參數及配置要求

1 工作環境
1.1 工作溫度 15-31℃
1.2 工作和存儲濕度 20-80%
1.3 工作電源 100–240 VAC (±10%), 50–60HZ.
2 用途
用于體外核酸片段擴增,具有溫度梯度功能。
3 性能與技術要求(*為必須滿足的指標)
3.1 主要性能
3.1.1 5.7"高分辨率超大彩色液晶顯示屏,實驗過程中實時顯示溫控及運行狀態
3.1.2 用戶可設置休眠模式使其更節電
3.2 主要技術指標(*為必須滿足的指標)
* 3.2.1 標準反應模板:96-well 0.2 ml 反應板或960.2ml PCR
*3.2.2 最大升降溫速率:4℃/
* 3.2.3 溫度梯度:同時運行8個不同溫度;溫度梯度范圍:30 - 100℃;溫差范圍:1 - 25℃
*3.2.4 溫度范圍:4-100℃
*3.2.5 5.7"高分辨率超大彩色液晶顯示屏,文字及溫度曲線全信息動態顯示,保證實時控制實驗過程
3.2.6 可存儲500個用戶程序
3.2.7 接口:1USB



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